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Un nuovo studio a revisione paritaria solleva dubbi sui metodi utilizzati per testare le potenziali impurità di DNA nel Comirnaty, il vaccino anti COVID-19 a mRNA prodotto da Pfizer e BioNTech.
Nello studio pubblicato questo mese su Methods and Protocols, i ricercatori tedeschi Brigitte König e Jürgen O. Kirchner hanno messo in dubbio l’affidabilità della tecnica PCR quantitativa (qPCR) utilizzata da Pfizer-BioNTech per misurare la contaminazione del DNA nel principio attivo del vaccino.
I ricercatori hanno fatto esperimenti dissolvendo le nanoparticelle lipidiche del Comirnaty. Hanno trovato livelli di impurità del DNA da 360 a 534 volte superiori al limite di 10 ng (nanogrammi) per dose stabilito dalle autorità di regolamentazione a livello globale.
I ricercatori hanno proposto che i metodi di spettroscopia di fluorescenza possano quantificare in modo più affidabile i livelli totali di contaminazione del DNA presenti nel prodotto vaccinale finale pronto all’uso.
Kevin McKernan, responsabile scientifico e fondatore di Medicinal Genomics, ha dichiarato a The Defender che, sebbene gli autori abbiano sollevato alcuni punti cruciali riguardo alla contaminazione del DNA nei vaccini anti COVID-19 a mRNA, i coloranti fluorimetrici possono essere inaffidabili e portare a letture gonfiate.
‘Una massiccia sotto-rilevazione delle impurità del DNA’
Produttori come Pfizer-BioNTech utilizzano un test di contaminazione del DNA che si basa su un metodo qPCR applicato al principio attivo del vaccino prima che venga combinato con le nanoparticelle lipidiche.
König e Kirchner hanno sottolineato che il test qPCR analizza solo un piccolo segmento di 69 coppie di basi del modello di DNA originale di 7.824 coppie utilizzato per produrre il vaccino a mRNA.
Ciò significa che Pfizer controlla meno dell’1% del modello originale. Il restante 99% non viene analizzato, con il risultato di “una massiccia sotto-rilevazione delle impurità del DNA”, hanno dichiarato.
I ricercatori sostengono inoltre che questo piccolo segmento potrebbe essere distrutto a velocità diverse rispetto al resto dei frammenti di DNA durante il processo di digestione enzimatica, confondendo ulteriormente le misurazioni accurate.
Un altro fattore di complicazione è che la sequenza target della qPCR si sovrappone a una sezione di DNA chiamata promotore T7 utilizzata per produrre l’mRNA. I macchinari cellulari o i sottoprodotti potrebbero legarsi a questa regione promotrice, bloccandone la rilevazione da parte del test qPCR.
Il Dr. David Speicher, coautore con McKernan e altri di uno studio preprint sui frammenti di DNA nei vaccini anti COVID-19 Moderna e Pfizer, ha espresso preoccupazioni simili.
La PCR può quantificare solo una particolare sequenza di DNA/RNA mirata dai primer utilizzati, ha dichiarato a The Defender. Se ci sono rotture o mutazioni nella sequenza bersaglio, “il DNA non si amplifica e i carichi non vengono riportati correttamente”.
“C’è anche il presupposto che il DNA del vaccino provenga solo dal plasmide e non da fonti batteriche o di altro tipo”, ha detto Speicher.
McKernan ha evidenziato un altro problema: le autorità di regolamentazione consentono alla Pfizer di utilizzare la qPCR per misurare il DNA e la fluorometria per misurare l’RNA.
“Le norme dell’EMA [European Medicines Agency] prevedono una misurazione raziometrica di RNA:DNA”, ha affermato. “I rapporti non devono essere misurati in pollici per l’RNA e in metri per il DNA”.
Ha detto che la Pfizer dovrebbe misurare sia l’RNA che il DNA utilizzando la fluorimetria o la qPCR. “Quando si permette loro di mescolare e abbinare strumenti in questo modo, si consente un inganno palese”.
McKernan ha anche condiviso una parte della domanda di brevetto di Moderna che riconosce che la qPCR è inadeguata per misurare piccoli frammenti di DNA.
‘Non stiamo più discutendo se i vaccini siano contaminati o meno’
Per evitare i problemi della qPCR, che si rivolge solo a una piccola frazione del DNA contaminante, König e Kirchner hanno proposto di utilizzare tecniche di spettroscopia di fluorescenza come il Qubit per quantificare i livelli totali di DNA nel prodotto vaccinale finale.
Questi metodi impiegano coloranti fluorescenti che si legano specificamente agli acidi nucleici come il DNA e l’RNA.
Gli esperimenti condotti sul Comirnaty con la tecnica della fluorescenza hanno rilevato una contaminazione del DNA significativamente superiore al limite di 10 ng/dose dopo la rottura delle nanoparticelle.
Figura 2. Quantificazione del DNA totale nei lotti di Comirnaty utilizzando la fluorometria Qubit con e senza l’aggiunta di Triton-X-100 come detergente per disintegrare le nanoparticelle lipidiche contenute nella formulazione del vaccino. Crediti: Brigitte König e Jürgen O. Kirchner.
McKernan, che ha scritto dei limiti della fluorometria sul suo Substack, ha invitato alla cautela nel considerare i risultati di König e Kirchner.
“I coloranti fluorometrici possono creare un cross-talk tra RNA e DNA, in modo tale che grandi quantità di RNA presenti nel vaccino inneschino il colorante specifico per il DNA per fornire un segnale dall’RNA”, ha dichiarato a The Defender. “Questo porta a letture gonfiate del DNA nell’articolo di König”.
Per risolvere questo problema, McKernan ha detto che i ricercatori dovrebbero eseguire un controllo RNasi. La RNasi è un enzima che cancella l’RNA, quindi non c’è alcuna interferenza da parte dell’RNA durante la misurazione del DNA.
Senza questo controllo, König e Kirchner “hanno lasciato una superficie di attacco facile per i loro critici”, ha detto.
In una ricerca in preparazione per la pubblicazione, McKernan ha dichiarato che diversi laboratori che eseguono esperimenti con la RNasi hanno osservato una riduzione di 10 volte del segnale del DNA osservato con la fluorimetria.
“Questo lascia comunque la contaminazione del DNA ben al di sopra dei limiti imposti dalla FDA [U.S. Food and Drug Administration, Agenzia federale per gli alimenti e i farmaci]”, ha detto McKernan. Ha sottolineato che la sua “critica dettagliata” allo studio non deve sminuire o far deragliare la richiesta di rivalutare i protocolli di analisi della contaminazione del DNA per i vaccini a mRNA.
“Non stiamo più discutendo se i vaccini siano contaminati o meno”, ha detto. “Stiamo solo discutendo se la contaminazione sia 10 volte o 100 volte superiori al limite e quanto i vaccini varino da lotto a lotto”.
Rischi potenziali di contaminazione del DNA
König e Kirchner hanno citato il timore che livelli di contaminazione del DNA superiori al previsto possano essere assorbiti dalle cellule umane durante la vaccinazione, con conseguenze sconosciute se il DNA si integra nel genoma.
Hanno citato il “rischio di mutagenesi inserzionale”, in cui i segmenti di DNA estraneo interrompono le normali sequenze geniche quando vengono inseriti nel genoma, portando eventualmente a mutazioni e malattie associate come il cancro.
Ricercatori come McKernan hanno già determinato che il DNA nel vaccino anti COVID-19 a mRNA include il gene del virus delle scimmie 40 (SV40), che promuove il cancro, e sequenze di DNA del plasmide dell’E. coli, lasciate dal processo di produzione del vaccino.
In una presentazione di febbraio alla conferenza International Crisis Summit-5, McKernan ha sottolineato che nella domanda di brevetto di Moderna per il suo vaccino anti COVID-19 a mRNA si riconoscevano i rischi della mutagenesi inserzionale.
Nella stessa domanda di brevetto si afferma che la contaminazione del DNA può causare il cancro:
“Il modello di DNA utilizzato nel processo di produzione dell’mRNA deve essere rimosso per garantire l’efficacia dei farmaci e la sicurezza, perché il DNA residuo nei prodotti farmaceutici può indurre l’attivazione della risposta innata e ha il potenziale di essere oncogeno nelle popolazioni di pazienti.”
Nella sua presentazione all’International Crisis Summit, McKernan ha affermato che “Stiamo sempre inducendo il cancro”. Ha proposto la seguente “ipotesi dei 3 colpi” sugli impatti negativi dei vaccini a mRNA sulla salute:
1. Aumento della mutagenesi con contaminazione del plasmide dsDNA [double-stranded DNA].
2. Gli effetti della N1-metil-pseudouridina utilizzata per stabilizzare l’RNA, che causano linfocitopenia, neutropenia, malattie legate alle IgG4, ecc.
3. L’inibizione dei “guardiani del genoma”, i geni antitumorali P53 e BRCA1.
Le norme sulla contaminazione del DNA sono “del tutto inadatte allo scopo”
McKernan ha sottolineato che le attuali norme che regolano il limite consentito di contaminazione del DNA nei vaccini sono “del tutto inadatte allo scopo”.
“Il pubblico deve sapere che le linee guida sulla contaminazione del DNA presuppongono un’emivita di 5-10 minuti del DNA nudo nel sangue”, ha dichiarato. “Una volta che il DNA è protetto dalle nanoparticelle lipidiche, non è più nudo e non si degrada, ma invece trasfetta le cellule”.
Secondo McKernan, i frammenti di DNA basati sui mammiferi fanno parte di un “vettore di terapia genica altamente replicativo progettato per produrre altre copie di se stesso” e quindi in grado di auto-amplificarsi indefinitamente una volta trasfettato.
“A cosa serve un limite di 10 ng se l’industria farmaceutica può far approvare una molecola di DNA amplificabile con questa regolamentazione?”, ha chiesto.
Le autorità di regolamentazione hanno stabilito un limite di contaminazione del DNA di 10 ng/dose nel 1998.
“10 ng sono una considerazione extracellulare”, ha dichiarato Karl Jablonowski, ricercatore senior di Children’s Health Defense. “Se si chiedesse quanto DNA estraneo dovrebbe essere consentito all’interno del nucleo, la risposta è zero”, ha dichiarato a The Defender.
Speicher ha aggiunto che le autorità di regolamentazione ignorano i frammenti di lunghezza inferiore a 200 paia di basi, perché probabilmente non sarebbero problematici se il DNA rimanesse fuori dalle nostre cellule.
Per avere un’idea, visto che il DNA dell’intero genoma umano ha una dimensione media di 6,41 pc (picogrammi), Jablonowski ha osservato che “10 ng di DNA corrispondono a 1.560 volte il nostro intero genoma “.
‘Quanto si può essere avventati con il genoma umano?’
Nonostante le possibili limitazioni, le autorità di regolamentazione europee hanno approvato il metodo qPCR per verificare se il Comirnaty rispetta i limiti di contaminazione del DNA richiesti di 10 ng/dose.
Secondo König e Kirchner, a parte i test qPCR del produttore sull’ingrediente attivo, “non viene effettuata alcuna ulteriore quantificazione sperimentale del DNA per il vaccino”.
Le autorità di regolamentazione sostengono che non è possibile testare il prodotto finale, a causa della potenziale interferenza delle nanoparticelle lipidiche che incapsulano l’mRNA.
Tuttavia, i ricercatori hanno sottolineato che i produttori possono quantificare con precisione l’mRNA in quelle stesse nanoparticelle. Hanno criticato le autorità di regolamentazione per essersi basate sui dati limitati dei produttori sulla qPCR e per non aver imposto la quantificazione diretta del DNA totale nel prodotto finale Comirnaty.
Dopo che altri scienziati hanno replicato il lavoro di McKernan, le agenzie di regolamentazione come la FDA, l’EMA e Health Canada sono state costrette a riconoscere la presenza di SV40 nei vaccini Pfizer.
Tuttavia, secondo McKernan, queste agenzie hanno sostenuto che i frammenti di DNA sono troppo piccoli in lunghezza e quantità per essere funzionali e non hanno preso provvedimenti per regolamentare ulteriormente o ritirare i vaccini dal mercato.
McKernan ha anche sottolineato che prima del National Childhood Vaccine Injury Act del 1986 (NCVIA, Legge nazionale sulle lesioni dei vaccini per l’infanzia), il limite di contaminazione del DNA era 1.000 volte inferiore all’attuale limite di 10 ng.
Questo allentamento delle normative, insieme allo scudo dalla responsabilità dell’NCVIA e ai progressi tecnologici, ha reso la tecnologia di sequenziamento del DNA “100.000 volte più economica”, ha detto, consentendo alle aziende produttrici di vaccini di aggiungere “reagenti di trasfezione [like LNPs] per garantire che questo DNA entri nelle cellule, possa auto-amplificarsi e interferire con i circuiti cellulari”.
McKernan ha detto:
“Perché la FDA non sequenzia questi vaccini? Che scusa hanno per non conoscere l’esatta sequenza e frequenza di ogni molecola di DNA e RNA di un vaccino che intendono iniettare in miliardi di persone? Quanto si può essere avventati con il genoma umano?”
Nonostante l’apparente inazione dell’agenzia, una recente richiesta di un cittadino canadese in base al Freedom of Information Act ha rivelato “un’attività allarmante dietro le quinte”, secondo McKernan.
“Le autorità di regolamentazione dicono al pubblico di non preoccuparsi della contaminazione, ma internamente cercano disperatamente di rimuovere questo DNA”, ha detto.